5ª PRÁCTICA: RECONOCIMIENTO DE PRÓTIDOS

 3.1. COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

OBJETIVO:

Cuando nosotros juntamos proteínas y agua, se forman soluciones coloidales debido al gran tamaño de las moléculas de las proteínas. Las soluciones coloidales son aquellas que están formadas por 2 o más fases, normalmente una fluida y otra dispersa en forma de partículas sólidas.

Estas soluciones pueden precipitar al ser calentadas a temperaturas mayores de 70ºC o al tratarse con soluciones salinas, ácidos, alcohol u otras sustancias.

Es un proceso irreversible producido por la desnaturalización (destrucción de la estructura tridimensional de una proteína o ácido nucleico que no supone la separación de sus aminoácidos o nucleótidos constituyentes.) de las sustancias indicadas al actuar sobre la proteína. Ellos la desordenan y destruyen sus estructuras.

MATERIALES:

-Materiales del laboratorio:

• Tubos de ensayo
• Gradilla
• Papel secante
• Pinzas de madera
• Mechero
• Vaso de precipitados 
• Pipeta
• Rellenapipetas

-Materiales biológicos:

• Leche

-Reactivos:

• Alcohol etílico
• Disolución de HCl al 10%

PROCEDIMIENTO:

1. Colocaremos en una gradilla 3 tubos de ensayo y con una pipeta echaremos 3 ml de leche en cada uno.
2. En uno añadimos 3 ml de HCl concentrado al 10% (ya vimos en una práctica anterior cómo hacerlo) y 3 ml de alcohol etílico en otro. EL tercer tubo de ensayo simplemente lo metemos al baño María.
3. Esperamos unos minutos para ver los resultados.

RESULTADOS:

Leche con alcohol etílico
Muestra de Nora y Laura Brasileiro

Leche con HCl
Muestra de Nora y Laura Brasileiro

Leche después de haber sido calentada al baño María

CONCLUSIÓN:

Observamos cómo la leche con el alcohol etílico y con el HCl se corta, es decir, se separa en suero y en ácido proteico diferenciados. 

Con la leche calentada al baño maría no obtuvimos los resultados esperados y aunque después lo calentamos directamente con el mechero, no se apreciaron indicios de que la leche comenzara a cortarse.

De todas formas, queda demostrado que los alcoholes y los ácidos son capaces de coagular las proteínas.

3.2. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)

OBJETIVO:

Una de las técnicas de coloración de las proteínas es la reacción de biuret. Éste método  detecta la presencia de compuestos de tres o más enlaces peptídicos (CO-NH) y, por tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos. Consiste en una solución acuosa de sulfato de cobre (CuSO4) en un medio alcalino (NaOH).

MATERIALES:

-Materiales del laboratorio:

• Tubos de ensayo
• Gradilla
• Marcador de vidrio
• Papel secante
• Pipeta
• Rellena pipetas
• Cuentagotas

-Materiales biológicos:

• Disolución de albúmina al 2%
• Leche
• Agua

-Reactivos:

•  Disolución de CuSO4 al 1% 
• Disolución deNaOH al 20%

PROCEDIMIENTO:

1. Cogemos 3 tubos de ensayo y los colocamos en una gradilla.
2. Al primero le echaremos 3 ml de disolución de albúmina. Al segundo, 3 ml de leche. Al tercero, 3 ml de agua ya que lo usaremos como experimento control. Todo ello ayudándonos de pipetas.
3. Seguidamente, echamos en cada tubo 4-5 gotas de disolución de CuSO4 y 3 ml de disolución de NaOH.
4. Agitamos fuertemente todos los tubos de ensayo y esperamos para observar los resultados. Si hay un cambio de coloración, significará que el resultado es positivo, en caso contrario, será negativo y la intensidad del color dependerá de la concentración de proteínas.

RESULTADOS:

Tubo de ensayo con albúmina, CuSO4 y NaOH antes de agitar

Tubo de ensayo con albúmina, CuSO4 y NaOH después de agitar

Tubo de ensayo con leche, CuSO4 y NaOH antes de agitar

Tubo con leche, CuSO4 y NaOH después de agitar

Tubo de ensayo con agua, CuSO4 y NaOH

CONCLUSIÓN:

Los tubos de ensayo que tenían la albúmina y la leche se han coloreado de morado, lo que quiere decir que la reacción de biuret es positiva e indica la presencia de proteínas.

El experimento control es negativo porque no ha habido un cambio en la coloración y porque el H2O no tiene proteínas.