6ª PRÁCTICA: EXTRACCIÓN DEL ADN

 OBJETIVO:

Para extraer el ADN necesitamos que los iones salinos de la muestra sean atraídos hacia las cargas negativas del ADN, que se disuelvan y así poder extraerlos.

Para ello, el ADN se disuelve en una disolución tampón (aquella que mantiene un pH casi constante cuando se le añaden pequeñas cantidades de ácido o de base) y conseguimos romper sus células mediante un detergente. En ese momento tendremos una solución con ADN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias.

Las proteínas se habrán separado en cadenas pequeñas por acción del detergente, lo que nos facilita que únicamente agregando el alcohol isoamílico, podamos extraer el ADN fácilmente.

MATERIALES:

-Materiales del laboratorio:

• Tubos de ensayo
• Gradilla
• Vaso de precipitados
• Papel secante
• Mortero
• Pipetas 
• Rellenapipetas
• Colador
• Varilla

-Materiales biológicos:

• Hoja de lechuga
• Plátano
• Tierra con gravas

-Reactivos:

• Alcohol isoamílico a 0ºC
• 5 ml de detergente (en nuestro caso Fairy)
• 120 ml de H2O destilada
• 1,5 g de NaCl
• 5 g de NaHCO3

PROCEDIMIENTO:

1. Elaboramos la solución tampón mezclando el agua destilada, NaCl, NaHCO3 y el detergente. Lo guardamos en la nevera para conservarlo hasta que lo vayamos a utilizar.
2. Aparte, en un mortero echamos unos trozos de lechuga troceados, agua y un poco de arena con gravas. Machacamos hasta que se forme un caldo.
3. 

   3. Con la ayuda de un colador separamos la parte líquida de los restos sólidos que hayan podido quedar.
4. Echamos 5 ml de esta mezcla líquida y 10 ml de la solución tampón.
5. Durante 10 min. aproximadamente agitamos.
6. Pasado el tiempo echamos 5 ml de esta disolución en un tubo de ensayo y 10 ml de alcohol isoamílico a 0ºC de forma que resbale por la pared del tubo de ensayo de la siguiente forma: https://drive.google.com/file/d/1zXWceadpDSFCOZvCDBrbGoc67m_GIE_A/view?usp=sharing
7. El alcohol queda por encima de la mezcla y con una varilla lo movemos para que suba el ADN.
8. El mismo proceso lo repetimos con un trozo de plátano en vez de con la hoja de lechuga y observamos los resultados en ambos casos.

RESULTADOS:

La parte blanca es el ADN de la hoja de la lechuga

Los trozos blancos que se encuentran suspendidos son el ADN del plátano

CONCLUSIONES:

Como resultado, hemos conseguido extraer el ADN de las células de nuestros compuestos vegetales.

En los resultados obtenidos también se encuentra el ARN por lo que para separarlo del ADN y poderlo ver mejor, deberíamos añadir una sustancia (por ejemplo el zumo de piña) con enzimas capaces de romper las moléculas del ARN.