8ª PÁCTICA: EXTRACCIÓN DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS

 OBJETIVO:

El objetivo de esta práctica es conseguir, a partir de unas hojas de un vegetal, obtener sus pigmentos fotosintéticos.

Para ello vamos a utilizar una técnica de separación de mezclas homogéneas llamado CROMATOGRAFÍA. Consiste en la separación de sustancias en una mezcla utilizando un medio de arrastre (en este caso: alcohol) y otro en el cual las sustancias puedan ser arrastradas por él (en este caso: papel secante).

MATERIALES:

Materiales del laboratorio:

• Papel secante
• Tubos de ensayo (x2)
• Mortero
• Placa Petri
• Tijeras
• Tiza
• Vaso de precipitados
• Rotuladores de colores
• Pipeta
• Rellena pipetas

Materiales biológicos:

• Tierra con gravas
• Hojas de puerro. También podríamos usar lombarda o zanahoria y el resultado quedaría teñido de morado o naranja respectivamente debido a sustancias que contienen, como por ejemplo la cianidina.

Reactivos:

• Alcohol de 96º
• Acetona (opcional)
• Gasolina (opcional)

PROCEDIMIENTO:

1. En un mortero vamos a mezclar unas hojas de puerro con alcohol. Podemos agregar una pequeña cantidad de tierra con gravas para facilitar y acelerar el proceso. Seguidamente, los machacaremos hasta que consigamos una suspensión más o menos homogénea de color verde.
2. El siguiente paso es separar la fase líquida de la sólida. Para ello podríamos utilizar un embudo con un papel de laboratorio, pero se quedaría gran parte de la clorofila retenida en él, así que simplemente vamos a decantarlo en un tubo de ensayo. Repetiremos este mecanismo otra vez más para optimizar los resultados.
   
   
   
3. Aunque repetimos la decantación, nos siguió quedando mucha fase sólida en el fondo del tubo de ensayo:
   
4.  A continuación, colocaremos la mitad de la suspensión en una placa Petri y encima un papel secante de forma que sea del tamaño adecuado.
5. Esperaremos durante 5-10 minutos para observar los resultados.
6. A la otra mitad que nos ha sobrado de antes, le agregaremos 10 ml de gasolina o acetona.

RESULTADOS:

Además hemos colocado una tiza en la placa Petri para apreciar también este proceso. Al ser un material muy poroso, actuará de la misma forma que el papel secante.

A la mitad de la disolución que le habíamos echado la acetona o la gasolina tendrían que aparecerle 2 fases bien diferenciadas, pero en nuestro caso no ha sucedido.

CONCLUSIÓN:

Hemos conseguido extraer 4 pigmentos fotosintéticos en esta práctica (en orden descendente): carotenos, xantofilas, clorofila A y clorofila B. En nuestro caso los carotenos apenas se pueden apreciar.

Los organismos fotosintéticos poseen unos pigmentos que hacen que se absorban solo ciertas longitudes de ondas del sol y que se reflejen otras. El conjunto de estas ondas es lo que se conoce como espectro de absorción:

Dependiendo del pigmento que predomine más, podemos tener diferentes colores en las hojas:

8.1. SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

Para comprender mejor el concepto de la cromatografía vamos a realizar un experimento aparte:

PROCEDIMIENTO:

1. Cortamos un trozo de papel secante más largo que ancho.
2. En él realizamos unas marcas con diferentes rotuladores de colores.
3. Lo metemos dentro de un vaso de precipitados con alcohol de 96º dentro, de forma que el alcohol no llegue a tocar las marcas sólo la parte más inferior del papel.
4. Tras esperar unos minutos observamos los resultados.

RESULTADOS:

Estado inicial de la cromatografía

Estado final de la cromatografía

CONCLUSIONES:

Hemos podido comprobar que esta separación de lo componentes de la tinta de los rotuladores se debe a un proceso de capilaridad y de densidad, ya que las sustancias más densas se sitúan en la parte inferior y las menos densas, en la parte superior.